非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光LAMP检测方法的建立

作者: 田纯见杨舒展段喻燕刘志玲林志雄罗琼陈茹

关键词: 非洲猪瘟病毒 DNA聚合酶环介导恒温扩增标准曲线模拟样品

摘要：为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)通用型高通量检测技术,利用高度保守的非结构DNA聚合酶G1211 R基因,制备质粒标准品,建立实时荧光LAMP方法,出现典型的S形核酸扩增曲线,扩增产物具有特异的熔解曲线.G1211R基因质粒标准品在1.81×105拷贝数/μL~1.81×109拷贝数/μL对数值与Ct值之间的线性关系良好.以ASFV E70株病毒核酸为模板,LAMP检测灵敏度达到21 pg,优于荧光定量PCR方法.重复性试验LAMP检测批内和批间变异系数均小于5%.LAMP方法检测ASFV特异性良好,与猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及昆虫核酸无交叉反应.以ASFV Arm 07株制备各种临床模拟样品,检出阳性率达到17.31%.检测方法的建立,可为非洲猪瘟防控提供新的技术手段,有利于不同基因型毒株检测和出入境快速筛查.

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非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光LAMP检测方法的建立

作者: 田纯见 杨舒展 段喻燕 刘志玲 林志雄 罗琼 陈茹

关键词: 非洲猪瘟病毒 DNA聚合酶 环介导恒温扩增 标准曲线 模拟样品

作者: 田纯见杨舒展段喻燕刘志玲林志雄罗琼陈茹

关键词: 非洲猪瘟病毒 DNA聚合酶环介导恒温扩增标准曲线模拟样品