犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子的原核表达

作者: 金婷婷 [1] 曲光刚 [2] 王长江 [1] 武曰星 [1] 唐世云 [2] 沈志强 [3]

关键词: 犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子原核表达免疫印迹

摘要：为筛选犬新孢子虫保护性抗原,克隆表达犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子(MIF)并对其免疫原性进行分析.根据GenBank公布的犬新孢子虫MIF(NcMIF)序列,利用分子生物学软件设计2套特异性引物,以NcMIF mRNA反转录产物为模版,采用PCR扩增出NcMIF基因和2种突变基因NcMIFm和Nc-MIFhis,选用原核表达载体pET26b,分别构建重组质粒pET26b-NcMIF和pET26b-NcMIFm.重组质粒分别转入E.coli BL21 (DE3)中进行表达,纯化后的蛋白利用免疫印迹法进行鉴定.结果显示,rNcMIF和rNcMIFm这2种重组蛋白在BL21(DE3)表达菌株中均为可溶性表达,诱导表达最佳条件为30℃诱导3hIPTG诱导浓度为1 mmol/L;Western blot分析结果表明,该表达产物能与抗rNcMIF绵羊血清发生反应,说明获得的蛋白具有较好的抗原性和特异性.

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犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子的原核表达

作者: 金婷婷 [1] 曲光刚 [2] 王长江 [1] 武曰星 [1] 唐世云 [2] 沈志强 [3]

关键词: 犬新孢子虫 巨噬细胞转移抑制因子 原核表达 免疫印迹

关键词: 犬新孢子虫巨噬细胞转移抑制因子原核表达免疫印迹